019_bf.pdf

Biofarmacia y Farmacocinética 381
ESTUDIO DE LA PERMEABILIDAD DEL SALBUTAMOL EN CÉLULAS
CACO-2: CLON TC7
Belén Valenzuela1,2, Adela Martín-Villodre1, Amparo Nácher1 (1) Dpto. Farmacia y Tecnología Farmacéutica, Universidad de Valencia. Avda. Vicente A. Estellés s/n 46100 Burjassot (Valencia) (2) Dpto. de Ingeniería, división de Farmacia y Tecnología Farmacéutica. Universidad Miguel Hernández de Elche. Ctra. Alicante- Valencia km. 87-03550 San Juan de Alicante. Introducción
estudio de permeabilidad tanto de fármacos en la práctica clínica para el tratamiento del como de xenobióticos en general (2). asma bronquial por sus importantes efectos broncodilatadores. La incidencia del asma, sobre Materiales y Métodos
todo en niños, está sufriendo un crecimiento
Las células Caco-2 TC7 se han sembrado en continuo. De hecho, según datos de la Sociedad un medio de cultivo adecuado. Española de Neumología y Cirugía Torácica, se Para los experimentos de transporte, las estima que la proporción de afectados hoy en día células se siembran con una densidad de 4·105 puede duplicar a la que había hace sólo dos células/cm2, sobre filtros permeables de décadas, siendo actualmente la enfermedad policarbonato. Estos filtros presentan un área de infantil más frecuente. La biodisponibilidad oral 1.13 cm2 y un diámetro de poro de 0.45 µm. Se del salbutamol, cuando se administra en forma montan sobre anillos insertados en una placa de comprimidos, resulta variable y baja, del multipocillo para cultivo. orden del 50 % e incluso inferior. Ello se puede Dada la densidad de la siembra inicial, las atribuir a su metabolismo hepático e intestinal y a células adquieren la confluencia a las 48 horas, a partir de este momento se inicia un proceso Bibliografía reciente ha demostrado que la espontáneo de diferenciación que se estabiliza, a secreción intestinal de fármacos se debe a la partir del día 17 al 21 posterior a la siembra. acción de numerosos sistemas transportadores El monoestrato celular diferenciado sobre el que modulan su incorporación al organismo. En filtro de policarbonato forma un sistema de dos la actualidad se conocen diferentes sistemas secretores que se encuentran en el tejido corresponde in vivo al lumen intestinal, y uno epitelial intestinal, y que limitan la incorporación BASOLATERAL (Bl), que corresponde in vivo al al organismo de numerosos fármacos. Los dos espacio intersticial en contacto con los capilares sanguíneos. Ambos se encuentran separados representativos son el sistema MDR (Multidrug por el filtro que contiene el monoestrato, tal como Resistance) y el MRP (Multi-drug resistance- Este sistema garantiza el libre acceso de los En este trabajo se estudia “in vitro” la nutrientes a ambos lados del monoestrato celular influencia de estos dos sistemas en la y permite determinar el flujo trans-epitelial de permeabilidad del salbutamol utilizando células Caco-2, clon TC7. Este clon fue aislado a partir de pases tardíos de células Caco-2 y constituye determinado midiendo la resistencia eléctrica un modelo completamente validado para el transepitelial (TEER). Solamente se han utilizado 382 VI Congreso SEFIG y 3as Jornadas TF
se observa en la Figura 2, la Papp determinada en sentido Bl-Ap es mayor que en sentido contrario. Cámara APICAL
(3.00±0.52)·10-7 cm/s (n=7), y la Papp Bl-Ap ha Monoestrato celular
sido (5.59±1.93)·10-7 cm/s (n=13). La secreción Filtro de policarbonato
significativamente en presencia de verapamilo Cámara BASOLATERAL
100 µM. La adición de este inhibidor a las Figura 1. Esquema del montaje experimental
permeabilidad Bl-Ap a 3.77±0.65·10-7 cm/s (n=6) y en cambio ha aumentado la permeabilidad Ap- las monocapas celulares que presentaron un Bl hasta 5.58±0.67·10-7 cm/s (n=6). Asimismo, la valor de TEER>600 Ω·cm2. Valores de TEER adición de probenecid (100 µM) a las soluciones inferiores no aseguran la integridad de la de ensayo ha reducido la permeabilidad Bl-Ap a monocapa y pueden inducir a errores en el 2.75±0.60·10-7 cm/s (n=6) y en sentido contrario, cálculo de la permeabilidad transepitelial de los Ap-Bl, ha aumentado hasta 5.22±0.84·10-7 cm/s (n=6). En presencia de zumo de pomelo sólo se Por una lado, se ha evaluado el paso ha podido determinar el valor de permeabilidad transepitelial del salbutamol 100µM en el sentido en sentido Ap-Bl, ya que ha mostrado ejercer un apical-basolateral (Ap-Bl) y en sentido contrario gran efecto tóxico sobre las células cuando era basolateral-apica (Bl-Ap). Por otro lado, se han añadido en la cámara basolateral. El valor P incorporado diferentes inhibidores de los Ap-Bl determinado ha sido 6.75±0.49·10-7 cm/s sistemas activos de secreción, en concentración (n=6). 100µM, a las soluciones de salbutamol. Se ha utilizado el verapamilo como inhibidor de la glicoproteína P intestinal (3), y el probenec id como inhibidor específico del sistema secretor 2= 1 + 100 mcM verapamilo3= 1 + 100 mcM probenecid MRP2 (4). Se ha utilizado, también, zumo de pomelo natural como un inhibidor de la glicoproteína P y del citrocromo P450 (5). El salbutamol se ha valorado mediante HPLC, utilizando un método validado previamente en nuestro laboratorio. Como parámetro representativo del transporte se ha utilizado el coeficiente de permeabilidad aparente (Papp), calculado mediante la siguiente Figura 2. Representación gráfica de las Papp (cm/seg) promedias
obtenidas para el salbutamol 100mM en las distintas condiciones de ensayo donde ∆Q·∆t-1 representa la velocidad de paso (µg/min), C0 es la concentración inicial en el compartimento dador (µg/ml), y A es el área del Estos resultados parecen sugerir que la secreción del fármaco desde la cara basolateral hacia la apical está mediada, al menos en parte, por la glicoproteína P intestinal y por el sistema Resultados y Discusión
MRP2. Ambos actúan como factor limitativo en el rendimiento neto de la permeabilidad del Se ha determinado el transporte vectorial del salbutamol a través del epitelio intestinal y salbutamol en las monocapas celulares. Como Biofarmacia y Farmacocinética 383
pueden ser un factor crítico en la 4. Horikawa M., Kato Y., Sugiyama Y. Pharm. biodisponibilidad oral del mismo. Res.19(9):1345-53 (2002).
5. Takanaga H., Ohnishi A., Matsuo H., Sawada Y. Bibliografía
6. Artursson P. J. Pharm. Sci. 79: 476-482 (1990).
Autor de contacto:
1. Taburet AM., Schmit B. Clin. Pharmacokinet. Amparo Nácher Alonso [email protected] 2. Caro I., Boluenc X., Rousset M., Meunier V., Bourrié M., Julian B., Joyeux H., Roques C., Avda. Vicente A. Estellés s/n 46100 Berger Y., Zweibaum A., Fabre G. I. J. Pharm. 3. Gatmaitan ZC., Arias M. Advantages in

Source: http://www.sefig.org/doc/Congreso%20Granada/019_BF.pdf

seaes.manchester.ac.uk

The Biogeochemistry of Vanadium Supervisors: Vicky Coker, Kath Morris, Jon Lloyd and Richard Pattrick University of Manchester: Earth, Atmospheric and Environmental Sciences Background Vanadium(V) is a common environmental contaminant associated with mining activity and fossil fuel combustion, while vanadium metal is an important ferroalloy in the steel industry. The most common and

gravity.uwa.edu.au

Vibration Isolation Support System for SCHENBERG Detector J.L. Melo, W.F. Velloso Jr. and O. D. Aguiar Instituto Nacional de Pesquisas Espaciais - INPE . Avenida dos Astronautas, 1758 São José dos Campos, SP 12227-010, Brazil e-mail : [email protected] Abstract : We designed a mechanical isolation system for a spherical resonant gravitational wave detector we are building in Brazil. We have

Copyright ©2010-2018 Medical Science